Activitatea enzimei lipazei pancreatice la puii de carne care consumă făină din fructul Roystonea regia din rație. Notă tehnică

activitatea

2 Institutul de Științe Animale, PO Box 24, San José de las Lajas, Mayabeque, Cuba

40 de pui de carne masculi au fost folosiți pentru a determina activitatea enzimei lipazei pancreatice de la puii de carne care consumă făină de fructe Roystonea regia (făină de palmier) în rație. Un design complet randomizat a fost aplicat cu patru tratamente, care au constat în înlocuirea cu 0, 5, 10 și 15% a făinii de palmier. La 42 de zile, au fost sacrificați pentru a obține pancreasul și s-a determinat activitatea enzimatică a lipazei pancreatice. S-a observat efectul dietei asupra acestui indicator, care a fost mai mare la puii care consumau făină de palmier, comparativ cu dieta de control (1983 vs 2500, 2566 și 3283 ml de NaOH/min/mg de proteine, respectiv) (P Oliva et. al. 2018). Acizii oleici, laurici, palmitici și linoleici predomină în uleiul său, care conține 8 și 18 atomi de carbon, responsabili în principal de statutul său de sursă de energie. Palmiche este unul dintre principalele alimente cu energie alternativă disponibile în Cuba, unde este popular ca sursă neconvențională de hrană pentru porci (Ly și colab. 2017), dar fără rezultate concrete la păsări.

Fiind o sursă mare de lipide, pentru a fi digerată în tractul gastro-intestinal al păsărilor, miezul de palmier are nevoie de enzime lipolitice. Dintre acestea, lipaza pancreatică este una dintre cele mai studiate. Această enzimă poate fi utilizată ca marker pentru digestia acestei fracții. Prin urmare, obiectivul acestui studiu a fost determinarea activității enzimatice a lipazei pancreatice la puii de carne care consumă făină de fructe Roystonea regia în rație.

Au fost folosiți pui de carne de sex masculin în vârstă de opt zile (HE21), adăpostiți în cuști metalice. Animalele au fost supuse dietelor experimentale, de la 8 zile la 42 de zile, acestea fiind formulate conform cerințelor stabilite de NRC (1994) pentru această categorie de păsări. Controlul a constat într-o dietă convențională cu soia-porumb. În celelalte trei tratamente, au fost incluse 5, 10 și 15% făină de palmier, astfel încât dietele izoproteice și izoenergetice au fost menținute pentru perioadele de început, creștere și sfârșit. În tot timpul experimentării, puii au avut acces gratuit la apă și alimente.

Palmierul, in natura, a fost obținut din provincia Mayabeque. Procesul de uscare a constat în desprinderea manuală a semințelor de miez de palmier și apoi a fost expusă la soare, întinse pe o placă de uscare, timp de cinci zile consecutive.

Materialul uscat a fost depozitat în saci, în interior, în depozite cu aerisire adecvată și umiditate scăzută. La fiecare cinci zile a fost măcinată cu restul componentelor dietei de cereale și cereale în proporția corespunzătoare, cu scopul de a prelungi durata de viață utilă a făinii de palmier, care se râncește rapid și îi scade calitatea biologică și gustul ( Oliva și colab. 2018).

La 42 de zile din experiment, zece găini au fost cântărite și sacrificate pe tratament, conform metodei de sângerare a venei jugulare. Pentru aceasta, s-au urmat procedurile tradiționale (asomare, sângerare și eviscerare), exact la două ore și treizeci de minute după ce animalele au ingerat alimente, cu scopul de a preleva probe pancreatice și de a obține omogenatul pancreatic. Imediat, pancreasul a fost îndepărtat din fiecare pui și scufundat în 4 ml/g de ser fiziologic, între 0 și 4 ° C, pentru transfer la laborator. Organele a trei animale au fost omogenizate manual. Au fost centrifugați la 5000 r.p.m. timp de 10 minute la 4 ° C într-o centrifugă frigorifică marca IEC CL31R Thermoscientific. Peleta a fost aruncată și supernatantul a fost depozitat în alicote mici la -80 ° C.

Concentrația de proteine ​​a fost determinată prin metoda lui Bradford (1976) pe un spectrofotometru Rigol UV-vis, seria Ultra-3400. Calculul concentrațiilor a fost efectuat prin interpolare a valorilor absorbantei probelor în curba standard a albuminei serice bovine (BSA) (0,01-5 mg/ml). Acest lucru a fost standardizat pentru toate omogenatele studiate la 3 mg/ml, pentru care s-au făcut diluțiile corespunzătoare în fiecare caz. Toate analizele au fost efectuate în trei exemplare.

Pentru a obține o fiabilitate maximă în determinarea activității enzimatice, a fost utilizat intervalul liniar propus pentru enzimă, pentru care s-a folosit un timp de incubație de cinci minute (León și colab. 2014). Activitatea lipazei a fost determinată de metoda propusă de Tietz și Fiereck (1966). Volumul necesar de NaOH (50 mM) a fost determinat pentru a neutraliza acizii grași eliberați, după degradarea enzimatică. Sistemul a fost menținut sub agitare moderată la 37 ° C și s-au folosit 3 mL de ulei de măsline ca substrat. Activitatea enzimei a fost exprimată ca ml de NaOH/min/mg de proteină.

Pentru analiza statistică a rezultatelor, a fost utilizat un design complet randomizat, cu patru tratamente și trei repetări (câte trei pancreas). Diferențele dintre medii au fost determinate în conformitate cu Duncan (1955) atunci când este necesar. Pachetul statistic folosit a fost Infostat (Di Rienzo și colab. 2012).

A fost observat un efect semnificativ al includerii făinii de palmier în dietă, în special asupra activității enzimei lipazei pancreatice la puii de carne (figura 1). Tratamentul cu includerea a 15% din făină de palmier a crescut activitatea enzimei în mod semnificativ în raport cu restul tratamentelor. Tratamentele cu 5 și 10% nu au diferit unul de celălalt. Controlul a fost tratamentul care a prezentat cea mai mică activitate (P Barberá 2016).

Figura 1 Activitatea enzimatică a lipazei pancreatice la puii de carne care consumă diferite niveluri de făină de nuci de palmier regal

Potrivit lui Gonçalves și colab. (2010), factori nutriționali precum metaboliții secundari, pot modifica, de asemenea, activitatea lipazei pancreatice. Acești autori au afirmat că absența flavonoidelor polimerice cu greutate moleculară mare, cărora li s-a atribuit acțiunea de inhibare a activității lipazei pancreatice, prin exercitarea unei interacțiuni specifice cu enzima, sunt de obicei prezente în fructele de culori intense, cum ar fi strugurii. Deși fructul palmierului are o culoare maro negricioasă, în screeningul fitochimic calitativ efectuat pe făina acestui fruct, a fost exclusă prezența metaboliților secundari (Ly și colab. 2017), ceea ce ar explica rezultatul care a fost obținut.

Barberá (2016) a demonstrat că modificările în compoziția dietei, care implică diferite surse de lipide și acizi grași, pot provoca modificări ale activității enzimei lipazei. Deși este important să se ia în considerare faptul că secrețiile pancreatice răspund la un stimul alimentar, activitatea acestor enzime, odată ce acestea intră în mucoasa intestinală, poate fi afectată și la puii de carne (León și colab. 2014), așa cum s-a observat în prezentul studiu.

Activitatea crescută a lipazei pancreatice ar putea crește digestia lipidelor, ceea ce poate fi benefic pentru animal, deoarece se știe că aceste biomolecule îndeplinesc mai multe funcții biologice importante în organism. Dintre acestea, se poate menționa că acestea constituie componente structurale ale membranelor, precum și forme de transport și depozitare a combustibilului catabolic. De asemenea, acționează ca o acoperire de protecție pe suprafața celulei, care este legată de recunoașterea celulă-celulă, specificitatea speciei și imunitatea țesutului. De asemenea, au o activitate biologică intensă, deoarece unele vitamine (A, B, D, E și K) și hormoni sunt printre ele.

Se concluzionează că includerea făinii de fructe de palmier în dietele pentru pui de carne crește activitatea enzimei lipazei pancreatice, ceea ce face posibilă digerarea lipidelor în tractul gastrointestinal.

Barberá, A. 2016. Influența matricei și a tipului de grăsime asupra digestibilității lipidelor și proteinelor unor produse pescărești. Teză de doctorat. Escola Tècnica Superior d’Enginyeria Agronòmica i del Medi Natural, Universitatea Politehnică din València, València, Spania. p. 42 [Link-uri]

Bradford, M.M. 1976. „O metodă rapidă și sensibilă pentru cuantificarea cantităților de micrograme de proteine ​​utilizând principiul legării de proteine-coloranți”. Biochimie analitică, 72 (1-2): 248-254, ISSN: 0003-2697, DOI: 10.1016/0003-2697 (76) 90527-3 [Link-uri]

Di Rienzo, J.A., Casanoves, F., Balzarini, M.G., González, L., Tablada, M. & Robledo, C.W. 2012. InfoStat. versiunea 2012, [Windows], Universitatea Națională din Córdoba, Argentina: Grupo InfoStat. Disponibil: http://www.infostat.com.ar [Link-uri]

Duncan, D.B. 1955. „Teste multiple și multiple F”. Biometrie, 11 (1): 1-42, ISSN: 0006341X, DOI: 10.2307/3001478 [Legături]

Goncalves, R., Mateus, N. & De Freitas, V. 2010. „Studiul interacțiunii lipazei pancreatice cu procianidinele prin metode optice și enzimatice”. Jurnalul de chimie agricolă și alimentară, 58 (22): 11901-11906, ISSN: 0021- 8561, DOI: 10.1021/jf103026x [Link-uri]

León, M. V, Colina, J.J., Rico, D., Araque, H., Rossini, M., Castañeda, M.V & de Arvelo, E.E.R. 2014. „Activitatea enzimelor pancreatice de tripsină și lipază la porcii hrăniți cu făină de pijiguao (Bactris gasipaes HBK) și lizină sintetică”. Jurnalul Facultății de Științe Veterinare, UCV, 55 (1): 11-17, ISSN: 0258-6576 [Link-uri]

Ly, J., Ayala, L. și Delgado, E.J. 2017. „Valoarea nutritivă a palmiciilor la porci și factorii care îl afectează”. Cercetarea creșterii animalelor pentru dezvoltare rurală, 29 (4), disponibil: https://www.lrrd.cipav.org.co/lrrd29/4/ly29064.html [Link-uri]

N.R.C. (Consiliul national de cercetare). 1994. Cerințe nutriționale pentru păsările de curte. Ediția a 9-a revizuită. Ed. National Academies Press, Washington D.C., SUA. p. 176, ISBN: 0309048923 [Link-uri]

Oliva, D., Martínez, M., Jiménez, L. și Ly, J. 2018. „Trăsăturile de performanță ale porcilor în creștere hrăniți cu diete de făină de nuci de palmier regal”. Revista Cubană de Științe Agricole, 52 (2): 1-8, ISSN: 2079-3480. [Link-uri]

Tietz, N.W. & Fiereck, E.A. 1966. „O metodă specifică pentru determinarea lipazei serice”. Clinica Chimica Acta, 13 (3): 352-358, ISSN: 0009-8981, DOI: 10.1016/0009-8981 (66) 90215-4. [Link-uri]

Primit: 29 iulie 2019; Aprobat: 08 ianuarie 2020