Int. J. Morphol., 30 (2): 432-438, 2012.

Studiu comparativ între soluțiile conservatoare cu și fără formol în placenta umană

Studiu comparativ între soluții conservatoare cu și fără formaldehidă în placenta umană

* Daniel Wolff; * Pablo Villa; * Alejandra Neirreitter; * Cecilia Ruibal; * Gustavo Armand Ugon; ** Guillermo Salgado & ***, **** Mario Cantín

* Departamentul de Anatomie, Facultatea de Medicină, Universitatea Republicii, Montevideo, Uruguay.

** Departamentul de Anatomie Normală, Facultatea de Medicină, Pontificia Universidad Católica de Chile, Santiago, Chile.

*** Departamentul de Medicină Dentară Integrală, Facultatea de Medicină Dentară, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.

**** Doctorat în științe morfologice, Facultatea de Medicină, Universidad de La Frontera, Temuco, Chile.

CUVINTE CHEIE: placenta; Tehnici anatomice; Soluție fixativă; Formol; Fără formalină.

CUVINTE CHEIE: placenta; Tehnici anatomice; Soluție fixativă; Formaldehidă; Fără formaldehidă.

INTRODUCERE

Tehnicile de fixare și conservare anatomice sunt menite să facă țesuturile stabile și să le protejeze împotriva deteriorării. Aceste tehnici au fost fundamentale pentru studiul anatomiei umane și veterinare, utilizate pentru a trata diferite organe și viscere în scopuri educaționale, academice și de cercetare. Acesta este motivul pentru care, de-a lungul istoriei, s-au căutat substanțe care să mențină, pe cât posibil, starea naturală a corpului sau a organelor (Busdamente și colab., 2007).

Rivera și colab. au declarat că tehnicile de conservare pe bază de formaldehidă utilizate în zona de anatomie a multor universități nu sunt cele mai potrivite, deoarece prezintă dezavantaje pentru piesele tratate, cum ar fi o rigiditate mai mare, retragerea volumului organelor și pierderea culoarea naturală (Hildebrand).

Ca o tehnică alternativă de fixare și conservare a structurilor, a fost dezvoltată metoda Prives, creată în laboratorul de anatomie al Primului Institut de Medicină din Leningrad, care se bazează pe principiul că o substanță foarte higroscopică, cum ar fi glicerina, captează în mod constant apa din atmosfera care înconjoară piesa, astfel încât să nu piardă în greutate, își păstrează volumul și capătă o consistență moale, acetatul de potasiu servește ca conservant și regulator al acidității, în timp ce timolul se caracterizează prin puterea sa dezinfectantă și fungicid (Correa, 2005).

Studiul macroscopic al placentei umane are o mare relevanță pentru predarea și cercetarea anatomică și pregătirea specimenelor pentru studii histologice (Bustamante și colab.), Precum și examinarea clinică a acesteia, mai ales atunci când există complicații în timpul sarcinii, al nașterii sau al nașterii. În ultimele cazuri, placentele sunt fixate în mod obișnuit prin imersie în soluții neutre formate de 3,7% sau 4,0% (Fox și colab., 1999).

Conform contextului descris, este de dorit să se utilizeze soluții fără formaldehidă pentru fixarea și conservarea structurilor anatomice. Obiectivul acestei lucrări a fost de a compara două metode de conservare anatomică, una cu formaldehidă (soluția Montevideo) și cealaltă fără formaldehidă (metoda Prives) folosind placenta umană ca organ experimental care evaluează parametrii macroscopici.

Material și metodă

Au fost utilizate 46 de placente umane unice provenite din nașteri normale și gestație pe termen lung, cu o greutate medie mai mare de 400 g, obținute de la Serviciul de maternitate al spitalului Pereira Rossell din Montevideo, Uruguay. Placentele au fost imediat supuse la spălare vasculară prin canulare și fixarea canulelor pe cale venoasă și au fost spălate cu apă la presiune constantă până când vasele au fost complet curățate.

Placentele au fost separate în două grupuri. Primul grup de placente (n = 22) a fost perfuzat cu presiune controlată pe cale venoasă cu soluție Montevideo, care conține: apă (70%), formaldehidă (15%), alcool metilic (5%), alcool etilic (5%), glicerină (2,5%), acid fenic (1%) și azotat de potasiu (1,5%). Al doilea grup de placente (n = 24) a fost perfuzat cu soluția metodei Prives conținând glicerină (45%), acetat de potasiu (10%), apă (40%) și timol (5%). Ambele perfuzii au fost efectuate manual.

Apoi, fiecare grup de placente a fost scufundat în soluția de conservare respectivă timp de 2 săptămâni într-un recipient închis la temperatura camerei. Cantitatea de soluție a fost determinată de volumul piesei (placente), astfel încât acestea să fie complet scufundate în soluție, plasând o greutate pe ele pentru a le împiedica să plutească. După ce s-a scurs timpul, au fost scoși din soluție și lăsați în aer la temperatura camerei încă 2 săptămâni.

Variabilele cantitative ale greutății și diametrului placentar au fost analizate în fiecare dintre piese, precum și variabilele calitative ale consistenței, culorii, mirosului și creșterii microorganismelor și macro. Consistența a fost evaluată în termeni de 1) normal sau proaspăt; 2) elastic sau ușor solid; și 3) solide sau cauciucate. Culoarea a fost clasificată ca 1) naturală, 2) roșu închis, 3) maro și 4) maro închis. Mirosul a fost clasificat ca 1) inodor; 2) miros ușor; 3) miros ușor și 4) miros iritant. În ceea ce privește creșterea macro și microorganisme, prezența sau absența macrocoloniilor a fost observată pe unele dintre suprafețele placentare.

Colectarea datelor a fost efectuată înainte de spălare, la 14, 21 și 28 de zile. Datele obținute au fost introduse de un operator într-un șablon Excel. Analizele statistice descriptive au fost efectuate utilizând software-ul Graphad 4.0.

Rezultate

Înainte de spălare și fixare, grupul de placente care trebuia tratat cu soluție de formaldehidă avea o greutate medie de 567,72 g, cu un diametru mai mare de 20,27 ± 1,508 cm (medie, SD) (interval între 18 și 23 cm), în timp ce diametrul cel mai mic observat a fost de 18,57 ± 1,561 (intervale de 15 și 21 cm). Placentele care trebuie tratate cu soluție fără formaldehidă au avut o greutate medie de 641,35g, cu un diametru mai mare de 20,46 ± 1,911cm (interval între 18 și 26cm), în timp ce diametrul mai mic a fost de 18,63 ± 1,657cm (interval între 16,5 și 22 cm ) (Tabelul I).

În ziua 14, placentele tratate cu soluție de formaldehidă au avut o greutate medie de 465,56, cu un diametru mai mare de 19,84 ± 1,451cm (interval între 17 și 22cm), în timp ce cel mai mic diametru a fost de 18,30 ± 1,777cm (interval între 14 și 21cm) . Placentele tratate cu soluție fără formaldehidă au prezentat o greutate medie de 530,02g, cu un diametru mai mare de 19,83 ± 1,761cm (interval între 17 și 24,5cm), în timp ce diametrul mai mic a fost de 18,21 ± 1,641 (interval între 16 și 22,5 cm) ( Tabelul I).

În ziua 21, placentele tratate cu soluție de formaldehidă au prezentat o greutate medie de 467,56, cu un diametru mai mare de 18,95 ± 1,558cm (interval între 16 și 21cm), în timp ce cel mai mic diametru a fost de 17,66 ± 1,606cm (interval între 14,5 și 20cm) . Placentele tratate cu soluție fără formaldehidă au avut o greutate medie de 532,40 g, cu un diametru mai mare de 19,10 ± 1,452cm (interval între 16 și 22,5cm), în timp ce diametrul mai mic a fost de 17,38 ± 1,641. (Tabelul I).

În cele din urmă, în ziua 28, placentele tratate cu soluție de formaldehidă au prezentat o greutate medie de 467,40, cu un diametru mai mare de 18,30 ± 1,477cm (interval între 15 și 20,5cm), în timp ce cel mai mic diametru a fost de 17,02 ± 1,547cm (interval între 13,5 și 19,5cm). Placentele tratate cu soluție fără formaldehidă au prezentat o greutate medie de 532,10g, cu un diametru mai mare de 18,9 ± 1,391cm (interval între 16 și 22,0cm), în timp ce în diametrul mai mic a fost de 17,23 ± 1,399 (interval între 15,5 și 20,5 cm ) (Tabelul I).

În raport cu consistența placentelor tratate, în grupul cu formaldehidă din ziua 14 au prezentat o consistență elastică, devenind solide spre ziua 21, caracteristică care a rămas până în ziua 28, în timp ce în grupul fără formaldehidă s-au observat modificări în 21 spre o consistență elastică. În niciunul dintre cazuri, placentele de consistență solidă nu au fost evidente în comparație cu grupul tratat cu formaldehidă. În ceea ce privește culoarea lor, placentele tratate cu formaldehidă au prezentat modificări semnificative ale nuanței atunci când au fost observate între zilele 14 și 28, prezentând o culoare maro și, respectiv, maro închis. În grupul fără formaldehidă, s-a observat doar o ușoară modificare a decolorării spre ziua 28 cu o culoare roșu închis (Tabelul II).

La evaluarea mirosului probelor, placentele tratate cu formaldehidă au prezentat un miros iritant în zilele 14 și 21, scăzând la un miros moderat în ceea ce privește iritarea până în ziua 28, în timp ce probele tratate fără formaldehidă nu au prezentat niciun miros. până în ziua 28 de evaluare. În niciunul dintre grupuri nu s-a observat prezența coloniilor de micro/macroorganisme pe oricare dintre suprafețele placentare (Tabelul II).

studiu

DISCUŢIE

Metoda de conservare fără formaldehidă utilizată sau metoda Prives au arătat proprietăți de conservare mai bune în toate caracteristicile macroscopice evaluate în cercetarea noastră asupra placentelor umane comparativ cu o soluție clasică pe bază de formaldehidă, o substanță cu care fiecare profesionist din domeniul sănătății a avut un contact timpuriu în zilele sale de permanență în laboratoarele de anatomie umană normală sau patologică (lmbus, 1985).

Utilizarea soluțiilor alternative fixative este un subiect de dezvoltare interesant pentru tehnicile de conservare și pregătire a materialului didactic în domeniul anatomiei, precum și al altor discipline, în principal datorită dovezilor științifice ale potențialului său cancerigen, deci evitarea utilizării sale este cea mai bună protecţie.

Placenta a fost stabilită ca o sursă excelentă de țesut pentru analiza cromozomilor. Cowles și colab. (1995) descriu utilizarea hibridizării fluorescente in situ (FISH) pe țesutul placentar pentru a obține informații despre anomalii cromozomiale, unde 75 la sută din cariotipurile observate în placentă cuprinzând aneuploizi, triploizi și normali sunt identificate în mod adecvat. Aceste informații sunt obținute în principal din placente fixate în formaldehidă, deoarece țesutul proaspăt nu este disponibil în mod normal pentru analiza cariotipului standard. Halder & Park (1999) au evaluat adecvarea fixării formalinei în diferite țesuturi de către FISH, obținând o eficiență de 14, 5 și 0% pentru placentele conservate pentru FISH-ul unic, dublu sau triplu. Aceste rezultate indică o rată scăzută de detectare a ploidiei cromozomiale în țesutul placentar fixat în formaldehidă.

Pe de altă parte, este important de menționat că orice metodă utilizată pentru conservarea placentelor trebuie efectuată în timp util. Jauniaux et al. (1991) subliniază că cele mai bune rezultate de conservare se obțin la perfuzarea imediată după livrare, cu o presiune menținută sub 60 mm Hg, unde microscopia electronică demonstrează o bună conservare a ultrastructurii celulare. Cu toate acestea, în cazurile în care performanța sa imediată este dificilă, fixarea perfuziei poate fi efectuată până la 6 ore după naștere cu rezultate histologice satisfăcătoare, cu toate acestea ultrastructural vor exista modificări ischemice la 10 minute după naștere, iar timpul de necroză va fi deja observat necroză ultrastructurală severă. În plus, prin analiza histomorfometrică au demonstrat că există diferențe semnificative între vilozitățile terminale ale placentelor atunci când sunt fixate fără perfuzie comparativ cu placentele perfuzate.

Aceste complicații legate de toxicitate nu pun în mod necesar în pericol educația medicală în anatomie, ci oferă mai degrabă o oportunitate de a utiliza medii de fixare mai bune și mai sigure. Am constatat că soluția de formaldehidă poate fi substituită metodei Prives pentru fixarea placentelor, rezultând probe de calitate mai bună și evitând efecte adverse asupra sănătății persoanelor expuse țesuturilor fixe.

În concluzie, folosind soluții alternative care substituie în mod avantajos formaldehida, cum ar fi formula Prives utilizată în studiul nostru, păstrează mai bine caracteristicile macroscopice ale placentelor, cum ar fi textura, culoarea și flexibilitatea lor, fără a genera un miros iritant, oprind procesul de descompunere până la lună. După rezultatele obținute, suntem în măsură să îl extrapolăm la animale mici și cu perspective viitoare de aplicare pe cadavrul uman.

REFERINȚE BIBLIOGRAFICE

Ballenguer, J. J. Unele efecte ale formaldehidei asupra căilor respiratorii superioare. Laringoscop, 94: 1411-3, 1984. [Legături]

Bustamante A. M. F.; Prieto G. R. H. & Binvignat, G. O. Conservarea placentei umane. Tehnica anatomică. Int. J. Morphol., 25 (3): 545-548, 2007. [Legături]

Correa, A. F. Conservarea pieselor anatomice uscate prin metoda prives. Jurnalul Electronic de Medicină Veterinară REDVET, VI (5), 2005. Disponibil la: www.veterinaria.org/revistas/redvet/n050505/050515.pdf [Link-uri]

Cowles, T. A.; Elder, F. F. și Taylor, S. Identificarea complementului cromozomial anormal în țesutul placentar fixat în formalină, încorporat în parafină. Prenat. Diagn., 15 (1): 21-6, 1995. [Link-uri]

Fasel, J. H.; Morel, P. & Gailloud, P. O strategie de supraviețuire pentru anatomie. Lancet, 365 (9461): 754, 2005. [Link-uri]

Fox, G. E.; Van Wesep, R.; Resau, J. H. & Sun, C. C. Efectul fixării formaldehidei prin imersie asupra greutății placentare umane. Arh. Pathol. Lab. Med., 115 (7): 726-8, 1991. [Legături]

Halder, A. & Park, Y. Identificarea țesutului adecvat din materialul autopsiei perinatale fixate în formalină pentru detectarea ploidiei cromozomiale prin interfața FISH. Indian J. Med. Res., 110: 102-6, 1999. [Link-uri]

Hammer, N; Löffler, S.; Feja, C.; Bechmann, I. & Steinke, H. Este posibilă înlocuirea formaldehidei în anatomia brută. J. Natl. Cancer Inst., 103 (7): 610-1, 2011. [Link-uri]

Hildebrand, M. Preparate anatomice. Beakeley și Los Angeles, University of California Press, 1968. [Link-uri]

Agenția Internațională pentru Cercetarea Cancerului (IARC). Formaldehidă, 2-butoxietanol și 1-terț-butoxi-2-propanol (Vol. 88, 2-9 iunie 2004). Monografii IARC privind evaluarea riscurilor cancerigene pentru oameni, 2004. Disponibil la: http://www.cie.iarc.fr/htdocs/announcements/vol88.htm. [Link-uri]

Agenția Internațională pentru Cercetarea Cancerului (IARC). Organizatia Mondiala a Sanatatii. Praful de lemn și formaldehida. Monografii IARC privind evaluarea riscurilor cancerigene pentru oameni. Vol 62. Lyon, IARC, 1995. [Legături]

Imbus, H. R. Evaluarea clinică a pacienților cu expuneri la formaldehidă legate de plângeri. J. Alergie Clin. Immunol., 76: 831-40, 1985. [Legături]

Jauniaux, E.; Moscoso, J. G.; Vanesse, M.; Campbell, S. & Driver, M. Fixarea perfuziei pentru investigația morfologică placentară. Zumzet. Pathol., 22 (5): 442-9, 1991. [Legături]

Moret de Arcia, O. J. Contribuție la studiul efectelor toxice ale formaldehidei, 1990. Disponibil la: http://www.complucad.com/frolga.htm [Link-uri]

Olsen, J. H.; Jersen, S.; Hink, M.; Faurbo, K.; Breum, N. O. și Jensen, O. M. Expunerea profesională la formaldehidă și riscul crescut de cancer nazal la om. Int. J. Cancer, 34: 639-44, 1984. [Legături]

Prieto, R.; Smok C. & Rojas, M. Experiențe de blog: placentă comparată. Int. J. Morphol., 29 (2): 432-5, 2011. [Legături]

Rivera, M. C.; Bonino, F.; Fioretti, C.; Galán, M.; Gigena, S.; Moine, R.; Mouguelar, H.; Natali, J. & Quinteros, R. Analiză multivariată aplicată etapei de deshidratare în tehnica de plastinare a rinichilor calului. Int. J. Morphol., 27 (3): 855-9, 2009. [Legături]

Thrasher, J. D. și Kilburn, K. H. Toxicitatea embrionară și teratogenitatea formaldehidei. Arh. Environ. Health., 56 (4): 300-11, 2001. [Link-uri]

Viegas, S.; Ladeira, C.; Nunes, C.; Malta-Vacas, J; Gomes, M.; Brito, M.; Mendonca, P. & Prista, J. Efecte genotoxice în expunerea profesională la formaldehidă: un studiu în laboratoarele de anatomie și patologie și producția de rășini de formaldehidă. J. Ocupă. Med. Toxicol., 5 (1): 25, 2010. [Link-uri]

Adresa de corespondenta:

Alejandra Veronica Neirreitter

Departamentul de Anatomie
Școala de Medicină UDELAR
Avda. Gral. Flores 2125
C.P.: 11800
Montevideo
URUGUAY

Primit: 16.08.2011
Acceptat: 23.01.2012

Tot conținutul acestei reviste, cu excepția cazului în care este identificat, se află sub o licență Creative Commons

Tel.: (56-45) 232 5571

Fax: (56-45) 232 5600


[email protected]