Efect de deparazitare a metronidazolului și tinidazolului versus Trichomonas muris la hamsteri

Anabel Hernández 1 *, Magaly Molina 1, Gustavo Morales 1, Julio Garmendia 2 și Zoraida Nava 2

1 Institutul Național de Cercetări Agricole. Centrul Național de Cercetări Agricole. Secția Sănătate Animală. Cutie poștală 70. Maracay 2101. Aragua. Venezuela. * E-mail: [email protected]

2 Universitatea Centrală din Venezuela. Facultatea de Științe Veterinare. Maracay. Aragua. Venezuela.

Cuvinte cheie: Metronidazol, tinidazol, hamster, Trichomonas muris, protozoare.

Efectele metronidazolului și tinidazolului asupra Trichomonas muris la hamsteri

Cuvinte cheie : Metronidazol, tinidazol, hamster, Trichomonas muris, protozoare.

Primit: 05/09/2007 Admis: 09/10/2007

Experimentarea cu animale de laborator a fost un factor important în avansarea și dezvoltarea în științele biomedicale, prin urmare, patologiile generate de diferite microorganisme, în special cele de origine parazită, interferează într-un mod preponderent în fiabilitatea rezultatelor unei investigații. Bolile asimptomatice care pot apărea pe aceste substraturi vii nu ar trebui să treacă neobservate de investigator, deoarece aceste infecții pot stimula modificări metabolice semnificative și fenomene adverse care ar duce la modificarea substanțială a rezultatelor obținute și la creșterea costurilor, a duratei studiului în timp și a resurselor de tot felul asigurat de comunitatea științifică. Pe lângă acestea, se adaugă cheltuielile generate în sistemele de prevenire și repopulare a coloniilor de animale. Astfel de complicații ar fi evitate prin prevenirea și eradicarea selectivă a organismelor patogene la animal din vivariu (Zúñiga și colab., 2001).

Infecțiile parazitare prin protozoare prezente în coloniile de hamster de laborator reprezintă o problemă dificil de controlat și trebuie rezolvate cu utilizarea și administrarea celor mai adecvați agenți chimioterapeutici. Metronidazolul posedă un spectru extraordinar de larg de activitate antiprotozoală și antimicrobiană și a fost utilizat pe scară largă la oameni și animale, fiind activ împotriva diferiților protozoare, paraziți anaerobi și bacterii anaerobe. Mecanismul de acțiune al nitroimidazolilor se reflectă în toxicitatea lor selectivă împotriva microorganismelor anaerobe sau microaerofile și a celulelor anoxice și hipoxice (Brunton și colab., 2006). După administrarea orală, metronidazolul se absoarbe rapid, cel puțin 80% în mai puțin de o oră. Biodisponibilitatea orală este de 100% și nu este modificată prin ingestia de alimente. Concentrațiile plasmatice obținute, atât cu administrare orală, cât și parenterală, sunt proporționale cu dozele administrate și dau naștere unor curbe de concentrație foarte similare în funcție de timp. Absorbția rectală este de asemenea bună (Fernández, 2002).

În ceea ce privește tinidazolul, la fel ca metronidazolul, este un derivat al nitroimidazolului (Fernández, 2002). Poate fi administrat în infecții cauzate de trichomonas, Giardioza și amebiaza, infecții de către organisme strict anaerobe și dincolo de această aplicație, se administrează și în inflamațiile gingiei (Ferreiro și colab., 2001). Tinidazolul este un antiparazitar și antimicrobian. Împarte același spectru de acțiune și eficacitate cu metronidazolul, dar timpul de înjumătățire util îi diferențiază, fiind pentru tinidazol mai mare decât pentru metronidazol. Acest 5-nitroimidazol redus produce pierderea structurii elicoidale a ADN-ului parazitului prin ruperea lanțurilor sale (Ferreiro și colab., 2001). Azotatul de tinidazol inhibă biosinteza ergosterolului și a altor steroli, prevenind demetilarea lanosterolului. Deteriorează peretele și modifică permeabilitatea membranei celulare și, ca rezultat, există o pierdere de elemente intracelulare necesare pentru viața microorganismului. De asemenea, inhibă biosinteza trigliceridelor și fosfolipidelor și activitatea enzimelor oxidative și perioxidative, acumulând concentrații toxice de peroxid de hidrogen în organite.

La animalele de laborator, trichomonas poate infecta o mare varietate de gazde, cele mai frecvent identificate specii fiind T. factură afectând șobolanul și șoarecele, T. microti Da T. criceti hamster, T. caviae cobai și T. muris șobolan, șoarece și hamster (Cuba, 1982). Infecții de T. muris Acestea pot fi diagnosticate prin semne clinice, cum ar fi enterita și cașexia, la hamsterii infectați și prin demonstrarea trofozoitului în conținutul proaspăt din cecum sau colon, emițând aceste mișcări bruste sau oscilante foarte caracteristice. În probele histopatologice preparate cu hematoxilină și eozină, din cecum sau colonul gazdelor, se pot observa structuri colorate, cum ar fi nucleul sau peretele celular slab colorat al parazitului, acesta din urmă apărând pliat pe sine (Lipman și colab., 1999).

La nivel mondial, s-au efectuat cercetări cu privire la acțiunea antiparazitelor asupra genului Trichomonas, printre care se remarcă cea efectuată în Canada, unde metronidazolul, tinidazolul și dimetronidazolul au fost folosite pentru a studia eliminarea Trichomonas la șoarecii de laborator. Rezultatele obținute au arătat rezistență la tratamentul cu dimetronidazol la concentrații crescânde ale medicamentului și au obținut eliminarea trichomonasului folosind 2,5 mg/ml metronidazol sau tinidazol furnizat în același mod, obținând o eficacitate de 100% (Roach și colab., 1988).

Acest studiu descrie rezultatele obținute la evaluarea efectului metronidazolului și tinidazolului asupra hamsterilor deparazitari infectați în mod natural cu Trichomonas muris.

MATERIALE ȘI METODE

Populația inițială din care a fost selectat eșantionul pentru prezentul studiu a fost de 680 de hamsteri aurii (Mesocricetus auratus) crescut în Bioterium pentru sănătatea animală a Centrului Național pentru Cercetări Agricole, aparținând Institutului Național pentru Cercetări Agricole, din Maracay, Aragua, Venezuela.

Eșantionul populației sa dovedit a fi 30 de hamsteri masculi pozitivi pentru Trichomonas muris și 10 negative, cu vârsta de 2 luni și greutatea medie de 100 g, menținute individual pe tot parcursul experimentării în cuști din oțel inoxidabil care conțin coajă de orez sterilă ca gunoi, hrană ad libitum pe bază de alimente concentrate (Ratarina®) și apă filtrată. S-au practicat măsuri igienice, cum ar fi: sterilizarea cuștilor, a băuturilor și a patului, modificările au fost făcute o dată pe săptămână în patul animalelor.

Evaluarea identificării protozoarelor la animale pentru a stabili starea fiziologică, atât la început, cât și în timpul protocolului de cercetare, a fost realizată prin necropsii; se prelevează probe din cecum și intestin subțire pentru examinare microscopică cu soluție salină pentru a detecta prezența T. muris, luând ca referință ceea ce este descris de Lipman și colab. (1999).

Tabelul 1. Reprezentarea schematică a tratamentelor utilizate pentru eradicarea Trichomonas ai murit.

efect

Examen parazitologic

Inițial, examinarea microscopică a fost efectuată pentru a determina infecția și pentru a selecta animale pozitive la Trichomonas muris. O picătură de soluție salină 0,85% a fost plasată separat pe o lamă și acoperită cu o lamă de 22 x 22 mm și observată la microscop cu un obiectiv 10X și apoi 40X. Diagnosticul a fost pus prin demonstrarea trofozoizilor care au permis observarea mobilității caracteristice a microorganismului și a formei chistice indicative de rezistență.

Pentru a determina procentul de deparazitare, a fost utilizată o relație semicantitativă între grupul tratat cu metronidazol și grupul tratat cu tinidazol pentru a determina procentul de eliminare a paraziților produs de medicamente. În acest scop, câmpul vizual al microscopului a fost împărțit în 4 cadrane, numărul paraziților prezenți într-unul dintre cadrane a fost numărat și înmulțit cu patru. Numărarea Trichomonas a fost efectuată pentru a determina procentul de deparazitare și a compara rezultatele obținute în grupele III cu metronidazol și IV cu tinidazol.

REZULTATE SI DISCUTII

Testul a început cu administrarea unei doze terapeutice de 2,5 mg/ml metronidazol și tinidazol la grupele III și respectiv IV, așa cum se arată în masa 2. Datele obținute după această dozare permit să se definească faptul că nu a existat nicio scădere a încărcăturii de paraziți în niciunul dintre tratamentele utilizate. Un astfel de rezultat contrastează cu cel raportat de Roach și colab. (1988), care au demonstrat că utilizarea metronidazolului și tinidazolului administrat în apă potabilă, la o concentrație de 2,5 mg/ml, a fost eficientă în eliminarea T. ai murit la șoareci de laborator.

Tabelul 2. Efect antiparazitar al deparazitării împotriva T. muris metronidazol și tinidazol la concentrații diferite.

Având în vedere acest lucru, al doilea tratament a fost aplicat cu o doză mai mare de medicament. Protocolul a fost repetat, variind concentrația medicamentului de la 2,5 la 3,75 mg/ml. Rezultatele au fost similare, deoarece nu s-a observat o scădere a încărcăturii de paraziți la această concentrație. Din nou, protocolul de lucru a fost repetat, crescând concentrația la 5,0 mg/ml, observând mișcări lente și atenuate ale paraziților, dar fără eliminarea acestora pentru animalele cărora li s-a administrat metronidazol. Pe de altă parte, la hamsterii care au primit tinidazol, s-a evidențiat o stare de latență și imobilitate a trofozoitului parazitului, dar fără eliminarea acestuia. Din nou, protocolul de lucru a fost repetat cu o creștere a concentrației celor două medicamente la 6,25 mg/ml. S-a înregistrat o scădere a parazitozei cu 20% cu tinidazol. Cu toate acestea, pentru metronidazol, nu s-a observat nicio reducere sau eliminare a parazitozei.

Continuarea testului și căutarea dozei pentru eliminarea T. muris Concentrația celor două medicamente a fost modificată la 7,5 mg/ml și administrarea unui aport zilnic și a unui alt test cu aceeași concentrație de 7,5 mg/ml, dar cu două aporturi pe zi, una dimineața 75 și alta după-amiază . Procentul de deparazitare a fost după cum urmează: În evaluarea clasică, s-a observat o eliminare cu 40% a parazitozei pentru hamsterii tratați cu tinidazol și o eliminare de 20% pentru cei tratați cu metronidazol, după cum se arată în figura 1. Cu toate acestea, la animalele cu 2 doze zilnice de medicamente, eliminarea totală a parazitului a fost evidențiată pentru cei care au primit tinidazol și doar o deparazitare de 50% pentru grupul care a primit metronidazol.

Rezistența la metronidazol a fost studiată pe larg la trichomonas în tulpini izolate de laborator. În Canada, Cudmore și colab. (2004) au efectuat un studiu privind tratamentul infecțiilor cauzate de Trichomonas vaginalis rezistent la metronidazol. În ceea ce privește tratamentul, administrarea orală sau intravenoasă a fost 85-95% eficientă. Reinfecția și alți factori trebuie luați în considerare atunci când tratamentul eșuează.

Acești autori raportează, de asemenea, că 5% din cazuri rezultă din tulpini de trichomonas rezistente la metronidazol. Gradul de rezistență la medicamente poate fi util în estimarea dozei care poate fi eficientă prin creșterea dozei sau prin combinarea mai multor medicamente. Informațiile limitate cu privire la efectul acestor medicamente fac îndoielnic dacă aceste tratamente sunt sau nu curative. Meri și colab. (2000) au efectuat o investigație asupra rezistenței trichomonasului la metronidazol și au descris tulpinile rezistente. S-au găsit mecanisme metabolice de rezistență la cultivarea acestor trichomonas atât în ​​aerobioză, cât și în anaerobioză.

Rezistența anaerobă la metronidazol este observată numai în studii de laborator pe tulpini de T . vaginalis Da T. făt expus la concentrații crescânde de medicament în cultură Spre deosebire de acestea, există tulpini care prezintă un tip de rezistență la metronidazol atunci când sunt izolate și cultivate în condiții aerobe.

Aceste tulpini rezistente la medicamente conțin niveluri mai scăzute de feredoxină, o proteină care catalizează reducerea metronidazolului în aceste microorganisme. Faptul că valorile feredoxinei scad, dar fără a dispărea complet, explică probabil de ce infecțiile cu tulpinile menționate mai sus tind să reacționeze la doze mai mari și mai mari de metronidazol (Brunton et la ., 2006).

CONCLUZII SI RECOMANDARI

Utilizarea metronidazolului ca antiparazitar ales pentru eliminarea trichomonasului la hamsteri nu a fost eficientă, deoarece a obținut doar o scădere cu 50% a paraziților la o concentrație de 7,5 mg/ml, administrându-l de 2 ori pe zi timp de 5 zile.

Se recomandă un tratament alternativ la alegere cu utilizarea tinidazolului pentru o perioadă mai mică de 7 zile la o concentrație de 7,5 mg/ml, administrându-l de 2 ori pe zi timp de cinci zile.

Nedeterminarea unei doze eficiente de 100% în acest model experimental pentru a elimina această parazitoză in vivo face posibilă recomandarea ambelor teste in vivo Ce in vitro pentru a determina prezența sau absența rezistenței împotriva Trichomonas muris sub acțiunea azomicinelor (2-nitroimidazol).

Se sugerează continuarea stabilirii unei linii de cercetare bazate pe activități care vizează determinarea unei scheme de administrare antiparazitare împotriva Trichomonas ai murit care este adecvat și eficient, în funcție de includerea și compararea în lucrările menționate, și anume: specii de animale, doză terapeutică. calea de administrare și timpul de dozare.

1. Botero D. și M. Restrepo. 1998. Parazitoza umană. Ed. A 3-a CIB. Medellin Columbia. [Link-uri]

2. Cuba A. 1982. Manual de patologie animală de laborator. Ed. Panamericana de Salud. [Link-uri]

3. Cudmore S., K. Delgaty, Sh. Hayward-McClelland, D. Petrin și E. Gary. 2004. Tratamentul infecțiilor cauzate de metronidazol-rezistent Trichomonas vaginalis. Pr. Clin. Microbiol., 17 (4): 783-793. [Link-uri]

4. Fernández I. 2002. Metronidazol. Universitatea Națională din Uruguay. Disponibil la: http://www.infecto.edu.uy/terapeutica/atbfa/metro/METRONIDAZOL.htm [Link-uri]

5. Ferreiro G., L. Badias, E. González și J. Aguirre. 2001. Tinidazol: un medicament antimicrobian cu activitate genotoxică. Pr. Cub. Inv. Biomed., 20 (1): 54-58. [Link-uri]

6. Brunton L.L., J.S. Lazo și K.L. Parker. 2006. Goodman și Gilman. Bazele farmacologice ale terapiei. A 10-a ed. Interamericana, Mexic. [Link-uri]

7. Lipman N.S., N. Lampen și H.T. Nguyen. 1999. Identificarea pseudochisturilor de Tritrichomonas ai murit la hamsterii armeni și transmiterea lor la șoareci. Lab. Anim. Sci., 49 (3): 313-315 [Link-uri]

8. Meri T., T.S. Jokiranta, L. Suhonen și S. Meri. 2000. Rezistența de Trichomonas vaginalis la metronidazol: Raport al primelor trei cazuri din Finlanda și optimizarea testelor de sensibilitate in vitro sub diferite concentrații de oxigen. J. Clin. Microbiol., 38 (2). 763- 767 [Legături]

9. Roach P.D., P.M. Wallis și M.E. Olson. 1988. Utilizarea metronidazolului, tinidazolului și dimetridazolului în eliminarea trichomonadelor de la șoarecii de laborator. Lab. Anim., 22 (4): 361-364. [Link-uri]

10. Zúñiga M., J. Turmari, S. Milocco și R. Piñeiro. 2001. Știință și tehnologie în protecția și experimentarea animalelor. McGraw-Hill/Interamericana din Spania. Madrid, Spania. [Link-uri]